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討論一下人肺癌細胞培養操作步驟及注意事項

發布時間:2021-10-22 點擊次數:297次
  人肺癌細胞由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。初代培養物開始*次傳代培養后的細胞,即稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限,則稱之為有限細胞系;已獲無限繁殖能力能持續生存的細胞系,稱連續細胞系或無限細胞系。無限細胞系大多已發生異倍化,具異倍體核型,有的可能已成為惡性細胞,因此本質上已是發生轉化的細胞系。無限細胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性;有的不僅有永生性,異體接種也有致瘤性,說明已惡性化。
 
  人肺癌細胞培養操作步驟:
 
  1.人肺癌細胞細胞用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
 
  2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
 
  3.在距離紫外燈直射范圍內20-30厘米處照射2-3小時;
 
  4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片完全浸在培養液中;
 
  5.將培養板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
 
  人肺癌細胞注意事項:
 
  1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B請在10X或20X物鏡下。
 
  2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。
 
  3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。
 
  4、收到細胞后,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。
 
  人肺癌細胞凍存和復蘇實驗原理:細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

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